Seftazidime Dirençli Pseudomonas Aeruginosa Suşlarında Per-1 Enziminin Sınıf-1 İntegronlarla İlişkisinin Moleküler Yöntemlerle Araştırılması

Abstract

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) çoğunlukla hastane infeksiyonları etkeni olan, yüksek mortalite ve morbiditeye yol açan önemli bir patojendir. P. aeruginosa'da beta-laktam antibiyotiklere direnç mekanizmalarından en sık görüleni beta-laktamaz üretimidir. PER-1 enzimi, sınıf A'da yer alan TEM veya SHV türevi olmayan bir genişlemiş spektrumlu beta laktamaz türevi olup özellikle seftazidim direncine yol açmaktadır. PER-1 gibi beta-laktamaz enzimlerini kodlayan direnç genleri integronlar gibi hareketli genetik elementler aracılığıyla bakteriler arasında aktarılabilmektedir.Bu çalışmada, hastane infeksiyonu etkeni P. aeruginosa suşlarında seftazidim direncine neden olan PER-1 enziminin varlığını göstermek, görülme sıklığını ortaya koymak ve sınıf-1 integronlarla ilişkisini saptayarak yeni oluşacak hastane infeksiyonu olgularını kontrol altına almak hedeflenmektedir.Seftazidime dirençli 100 adet Pseudomonas aeruginosa suşında PER-1 gen bölgesi polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile tespit edildi. Suşların RAPD-PZR yöntemiyle klonal yakınlıkları belirlendi. PER-1 enzimi taşıyan 40 suşta integronların 5' ve 3' korunmuş bölgelerine özgü primerler kullanılarak PZR ile sınıf-1 integronların varlığı araştırıldı. Farklı RAPD-PZR paternlerini temsil eden suşlarda, blaPER-1 ve sınıf-1 integronların korunmuş bölgelerine özgü primerler kombine edilerek gerçekleştirilen PZR ile PER-1 geninin sınıf-1 integronlar ile ilişkisi araştırıldı.İncelenen suşlarda %40 oranında PER-1 enzimi tespit edildi. Pseudomonas aeruginosa suşları arasında saptanan dört ana klonun yüksek prevalanstan sorumlu olduğu RAPD-PZR sonuçları ile ortaya kondu. PER-1 enzimi taşıyan suşlarda %62.5 oranında sınıf-1 integron saptandı ve 2 adet Pseudomonas aeruginosa suşunda PER-1 geninin sınıf-1 integronlarla ilişkili olduğu gösterildi. Hastanemizde PER-1 enziminin yaygın olduğu ve bu enzimi üreten birçok suşun ?klonal ilişkili? oluşunun horizontal yayılıma işaret ettiği, blaPER-1'in sınıf-1 integronlarla ilişkili olmasının bu genin yayılımını hızlandırabileceği sonucuna varıldı.Anahtar sözcükler: Pseudomonas aeruginosa, beta-laktamaz, PER-1, sınıf-1 integron

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is an important pathogen that causes nosocomial infections and highly leads to mortality and morbidity. The most encountered resistant mechanism against beta lactam antibiotics is beta-lactamase production in P.aeruginosa. PER-1 enzyme is derived from an extended spectrum beta-lactamase that is non-TEM-, non-SHV-derived in class A and especially causes ceftazidime resistance. The resistance genes that encode beta lactamase enzymes such as PER-1 can be transferred among bacteria by mobile genetic elements such as integrons.In this study, it is aimed to determine the PER-1-type- beta lactamase enzyme that causes ceftazidime resistance by molecular methods, determine the frequency and detect the relationship between the enzyme and class-1 integrons .PER-1 gene was detected in 100 ceftazidime resistant Pseudomonas aeruginosa strains by polymerase chain reaction (PCR). The clonal relationship between strains was determined by RAPD-PCR. The existence of class 1 integron was investigated in 40 PER-1 enzyme bearing strains with using primers that are specific to 5? and 3? conserved segments of class-1 integrons by PCR. The association between PER-1 gene and class-1 integrons was investigated with combining primers that are specific for conserved segments of blaPER-1 and class-1 integrons by PCR in representative strains that possess different RAPD-PCR patterns.PER-1 gene was detected in 40% of the isolates. It is exhibited that four principal clones that were detected in Pseudomonas aeruginosa strains were responsible for high prevalence by RAPD-PCR results. Class-1 integron was detected in 62.5% of the PER-1 enzyme bearing strains and association between PER-1 gene and class-1 integrons was shown in 2 Pseudomonas aeruginosa strain. We concluded that PER-1 enzyme is common in our hospital and the existence of the clonal relationship between enzyme bearing strains indicates horizontal dissemination, the association between blaPER-1 and class-1 integrons can accelerate dissemination of this gene.Key Words: Pseudomonas aeruginosa, beta-lactamase, PER-1, class-1 integron