Seftazidime Dirençli Pseudomonas Aeruginosa Suşlarında Per-1 Enziminin Sınıf-1 İntegronlarla İlişkisinin Moleküler Yöntemlerle Araştırılması

Abstract

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) çoğunlukla hastane infeksiyonları etkeni olan, yüksek mortalite ve morbiditeye yol açan önemli bir patojendir. P. aeruginosa'da beta-laktam antibiyotiklere direnç mekanizmalarından en sık görüleni beta-laktamaz üretimidir. PER-1 enzimi, sınıf A'da yer alan TEM veya SHV türevi olmayan bir genişlemiş spektrumlu beta laktamaz türevi olup özellikle seftazidim direncine yol açmaktadır. PER-1 gibi beta-laktamaz enzimlerini kodlayan direnç genleri integronlar gibi hareketli genetik elementler aracılığıyla bakteriler arasında aktarılabilmektedir.Bu çalışmada, hastane infeksiyonu etkeni P. aeruginosa suşlarında seftazidim direncine neden olan PER-1 enziminin varlığını göstermek, görülme sıklığını ortaya koymak ve sınıf-1 integronlarla ilişkisini saptayarak yeni oluşacak hastane infeksiyonu olgularını kontrol altına almak hedeflenmektedir.Seftazidime dirençli 100 adet Pseudomonas aeruginosa suşında PER-1 gen bölgesi polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile tespit edildi. Suşların RAPD-PZR yöntemiyle klonal yakınlıkları belirlendi. PER-1 enzimi taşıyan 40 suşta integronların 5' ve 3' korunmuş bölgelerine özgü primerler kullanılarak PZR ile sınıf-1 integronların varlığı araştırıldı. Farklı RAPD-PZR paternlerini temsil eden suşlarda, blaPER-1 ve sınıf-1 integronların korunmuş bölgelerine özgü primerler kombine edilerek gerçekleştirilen PZR ile PER-1 geninin sınıf-1 integronlar ile ilişkisi araştırıldı.İncelenen suşlarda %40 oranında PER-1 enzimi tespit edildi. Pseudomonas aeruginosa suşları arasında saptanan dört ana klonun yüksek prevalanstan sorumlu olduğu RAPD-PZR sonuçları ile ortaya kondu. PER-1 enzimi taşıyan suşlarda %62.5 oranında sınıf-1 integron saptandı ve 2 adet Pseudomonas aeruginosa suşunda PER-1 geninin sınıf-1 integronlarla ilişkili olduğu gösterildi. Hastanemizde PER-1 enziminin yaygın olduğu ve bu enzimi üreten birçok suşun ?klonal ilişkili? oluşunun horizontal yayılıma işaret ettiği, blaPER-1'in sınıf-1 integronlarla ilişkili olmasının bu genin yayılımını hızlandırabileceği sonucuna varıldı.Anahtar sözcükler: Pseudomonas aeruginosa, beta-laktamaz, PER-1, sınıf-1 integronPseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is an important pathogen that causes nosocomial infections and highly leads to mortality and morbidity. The most encountered resistant mechanism against beta lactam antibiotics is beta-lactamase production in P.aeruginosa. PER-1 enzyme is derived from an extended spectrum beta-lactamase that is non-TEM-, non-SHV-derived in class A and especially causes ceftazidime resistance. The resistance genes that encode beta lactamase enzymes such as PER-1 can be transferred among bacteria by mobile genetic elements such as integrons.In this study, it is aimed to determine the PER-1-type- beta lactamase enzyme that causes ceftazidime resistance by molecular methods, determine the frequency and detect the relationship between the enzyme and class-1 integrons .PER-1 gene was detected in 100 ceftazidime resistant Pseudomonas aeruginosa strains by polymerase chain reaction (PCR). The clonal relationship between strains was determined by RAPD-PCR. The existence of class 1 integron was investigated in 40 PER-1 enzyme bearing strains with using primers that are specific to 5? and 3? conserved segments of class-1 integrons by PCR. The association between PER-1 gene and class-1 integrons was investigated with combining primers that are specific for conserved segments of blaPER-1 and class-1 integrons by PCR in representative strains that possess different RAPD-PCR patterns.PER-1 gene was detected in 40% of the isolates. It is exhibited that four principal clones that were detected in Pseudomonas aeruginosa strains were responsible for high prevalence by RAPD-PCR results. Class-1 integron was detected in 62.5% of the PER-1 enzyme bearing strains and association between PER-1 gene and class-1 integrons was shown in 2 Pseudomonas aeruginosa strain. We concluded that PER-1 enzyme is common in our hospital and the existence of the clonal relationship between enzyme bearing strains indicates horizontal dissemination, the association between blaPER-1 and class-1 integrons can accelerate dissemination of this gene.Key Words: Pseudomonas aeruginosa, beta-lactamase, PER-1, class-1 integron