Biyojen Aminlerin Yüksek Basınç Sıvı Kromatografisi ile Ayırımı ve UV-Görünür Spektrofotometrik Tayinleri

Abstract

Bu çalışmada biyojen aminlerden, histamin, kadaverin, ve tiramin için su-metanol ortamında asetilaseton reaktifi ile türevlerine dönüştürülmesinden faydalanarak Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) yönteminin kullanıldığı yeni bir tayin yöntemi geliştirildi. Geliştirilen tayin yöntemi genel olarak, bu maddelerin asetilaseton reaktifi ile kolon öncesi türevlerine dönüştürülmesi, Termo Hypersil Gold ters-faz ayırım kolonu ile türevlerin bu kolonda ayırımlarının sağlanması, daha sonra sisteme bağlı UV-Görünür spektrofotometre ile gerçek numunede analizlerinin yapılması aşamalarını içermektedir. HPLC sisteminde akış hızı 0,9 mL/dk ve hareketli faz olarak % 35 asetonitril-su (h/h) karışımı kullanılarak 315 nm dalga boyuna ayarlanan UV-Görünür spektrofotmetre ile 11 dakika içinde biyojen amin türevlerin ayırımları iyi bir resolusyonla başarıldı. Biyojen aminlerin gözlenebilme sınırları histamin için 0,2346 mg/L, kadaverin için 0,0310 mg/L ve tiramin için 0,0455 mg/L olarak bulundu. Geliştirilen yöntem piyasada satılan altı farklı elma suyu numunesine uygulandı. Biyojen amin türevlerinin 20 mL elma suyundan geri alınabilirlik % 0,13-0,82 bağıl standart sapma ile % 99,73-100,28 düzeylerinde olduğu belirlendi.

In this study, a new determination method was developed using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for biogenic amines, histamine, cadaverine and tyramine derivatives obtained with acetylacetone reactive in water-methanol medium. Developed method generally involves transforming of these agents into pre-colon derivatives and then separating them in the column Thermo Hypersil Gold reversed-phase column, along with and UV-vis spectrophotometer at 315 nm wavelength connected to the system. Flow rate in HPLC system was found to be 0,9 mL/min and separation of biogene amine derivatives was succeeded with a good resolution in 11 minutes by using 35 % acetonitriles-water (v/v) mixture as mobile phase. Detection limits of biogenic amines were found as 0,2346 mg/L, 0,0310 mg/L and 0,0455 mg/L for histamine, cadaverine and tyramine, respectively. The newly developed method was applied to six different commercially available apple juice specimens. Recovery of biogene amine derivatives from 20 mL apple juice was determined as % 0,13-0,82 with relative standard deviation in the range of 99,73-100,28 %.