Alt Solunum Yolu Örneklerinden İzole Edilmiş Acinetobacter Baumannii İzolatlarında Biyofilm Araştırılması

Abstract

Acinetobacter baumannii 2018 yılında Dünya Sağlık Örgütü tarafından yayınlanan 'yeni antibiyotik keşfi gereken bakteriler' listesinde ilk sırada yer almıştır. Bakterinin antibiyotik direncinde rol alan biyofilm yapısı hastalıklarla ilişkisinin açıklanmasında da yol göstericidir. A. baumannii ventilatör ilişkili pnömoni, septisemi, katater ilişkili bakteriyemi gibi ciddi nozokomiyal enfeksiyonlara sebep olmaktadır. Bu çalışma ile alt solunum yolu örneklerinden izole edilen Acinetobacter baumannii izolatlarında biyofilm araştırılması amaçlanmıştır. Biyofilm mikrotitrasyon plağı yöntemi ile çalışıldı. Kanlı agara pasajlanmış A.baumannii izolatlarının taze kültürlerinden steril öze yardımıyla alınan bir kaç koloni %0,25 glukoz içeren TSB içeren tüplere alınarak 37°C'de 1 gece inkübe edildi. Kültürler 1/20 dilüe edilerek 200 µl'si 96 kuyucuklu düz tabanlı polistren mikrotitrasyon plağına aktarılarak 37°C'de 24 saat inkübe edildi. İnkübasyondan sonra sıvı besiyeri döküldü kuyucuklar distile su ile 3 kez yıkandı ve kurutma kağıdı üzerine ters çevrilerek kurutuldu. Kuyucuklara %1'lik kristal viyole solüsyonundan 100 µl dağıtıldıktan sonra 15 dakika oda sıcaklığında inkübe edildi. İnkübasyon ardından kuyucuklar 3 kez distile su ile yıkandı ve kurutma kağıdına ters çevrilerek kurutuldu. Kuyucuklara 200 µl etanol/aseton (80:20) ilave edildikten sonra 10 dakika bekletilip boya çözdürüldü. Dalga boyu 540 nm olan filtre ile optik ELISA okuyucuda plaklar okutuldu. Örneklerin (n=55) biyofilm oluşumu incelendiğinde biyofilm oluşturmayanlar (n=12) ve biyofilm oluşturanlar (n=43) olarak saptandı. Biyofilm oluşturan örneklerde sırasıyla amikasin, gentamisin, imipenem direnç durumlarına bakıldığında (%67, %93, %100) antibiyotik direnci saptanırken; biyofilm oluşturmayan örneklerde bu oranlar (%58, %83, %100) olarak saptanmıştır. Sonuç olarak alt solunum yolu örneklerinden izole edilen Acinetobacter baumannii izolatlarındaki biyofilm ve direnç durumu bu bakteriye bağlı enfeksiyonların tedavisinde önem arz etmektedir.

In 2018 World Health Organization published a top list of bacteria that needed a new antibiotic discovery, and A. baumannii is on the list. The biofilm structure of bacteria, which plays a role in antibiotic resistance, also guide an explaining its relationship with the diseases. A. baumannii causes serious nosocomial infections such as ventilator-associated pneumonia, septicemia, and catheter-associated bacteremia. This study aimed to investigate biofilm in Acinetobacter baumannii isolates isolated from lower respiratory tract samples. Biofilm presence was studied on the microtitration plate method. A few colonies taken from fresh cultures of A.baumannii isolates passaged on blood agar with the help of a sterile loop were placed in tubes containing 0.25% glucose TSB and incubated at 37°C overnight. Cultures were diluted 1/20 and 200 µl was transferred to a 96-well flat-bottom polystyrene microtiter plate and incubated at 37°C overnight. After incubation, the liquid medium was poured, and the wells were washed 3 times with distilled water and dried by inverting on blotting paper. After distributing 100 µl of 1% crystal violet solution to the wells, it was incubated for 15 minutes at room temperature. After incubation, the wells were washed 3 times with distilled water and dried by inverting on blotting paper. After adding 200 µl of ethanol/acetone (80:20) to the wells, the dye was to disssolved for 10 minutes. Plates were read in an optical ELISA reader with a 540n filter wavelength. The study collected 55 samples, 12 samples were non-biofilm forming, and 43 samples were biofilm-forming. The antibiotic resistance status of amikacin, gentamicin, and imipenem in biofilm-forming samples (67%, 93%, 100%), whereas in non-biofilm-forming samples (58%, 83%, 100%) respectively. As a result, biofilm and resistance status in Acinetobacter baumannii isolates isolated from lower respiratory tract samples are important in the treatment of infection related to this bacterium.