Akdeniz Bölgesindeki Gökkuşağı Alabalıklarından İzole Edilen Flavobacterium Psychrophilum Suşlarının Fenotipik ve Genetik Farklılıklarının Belirlenmesi

Abstract

Bu çalışma ile Akdeniz bölgesinde bulunan 14 farklı gökkuşağı alabalığı (Oncorhynchus mykissWalbaum, 1792) işletmesinde Flavobacterium psychrophilum’un varlığı ile fenotipik ve genotipiközelliklerinin araştırılması hedeflenmiştir. Bu amaçla Kasım 2012-Mart 2013 tarihleri arasında ticari alabalıkişletmelerinden sperm, yumurta, gözlenmiş yumurta, keseli larva ve 0.2-5 gr ağırlığındaki larvalardan örnekleralınmıştır. Örneklerden olası F. pyschrophilum’un izolasyonu konvansiyonel mikrobiyolojik metotlarkullanılarak yapılmış ve toplamda 172 adet izolat elde edilmiştir. Elde edilen tüm izolatların enzim aktivitesiAPI ZYM test sistemine göre tespit edilmiştir. Yapılan fenotipik testler sonucunda F. psychrophilum olduğudüşünülen 65 izolat belirlenmiştir. Bu izolatların moleküler olarak doğrulanmasında F. pyschrophilum spesifikPolimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) metodu kullanılmıştır. Hasta balıklardan izole edilen 17 izolatın (11karaciğer, 3 dalak ve 3 böbrek) F. psychrophilum’a özgü 971 bp’lik bant verdiği saptanmıştır. İzolatlar arasıklonal ilişkinin belirlenmesi amacıyla RAPD-PCR metodu kullanılmıştır. Bu metoda göre F. psychrophilumizolatlarının beş farklı RAPD bant paterni (F1-F5) verdiği saptanmıştır. İzolatların % 85 benzerlik katsayısınagöre bir “unique” tip (F1 nolu genotip) ve bir küme içerisinde gruplandığı belirlenmiştir. Yapılanantibiyogram testi sonucu, izolatların trimetroprim/sulfametakzol, klindamisine, ampisillin, tekrasiklin,enrofloksasin, kloramfenikole, oksitetrasiklin, florfenikol ve tobramisin’e duyarlı olduğu belirlenmiştir. Sonuçolarak, bu çalışmadan elde edilen bulgular RAPD-PCR'da kullanılan M13 primerinin F. psychrophilumizolatları arasındaki klonal ilişkinin belirlenmesinde kullanılabilir olduğunu göstermiştir.