İn Vitro Ortamda Kuersetinin Enfeksiyöz Pankreatik Nekrozis Virüs (İPNV) Replikasyonuna Etkisi

Abstract

Projede, IPNV' yi üretmek için rainbow trout gonad (RTG-2) hücre kültürü kullanıldı. Hücreler kültüre edildikten sonra IPNV inokule edilerek CPE oluşumu takip edildi. Projede kullanılan antioksidan madde olan kuersetinin RTG-2 hücresindeki nonsitotoksik dozu Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Sigma-Aldrich) ile belirlendi. Kuersetinin, IPNV replikasyonu üzerindeki etkisinin belirlenmesinde titrasyon testi, sitopatojenik etki redüksiyon testi ve qRT-PCR testleri kullanıldı. Üç tekrarlı sitotoksisite denemelerinden elde edilen verilerin ortalama değeri hesaplandı ve kuersetinin farklı dozlarının uygulandığı gruplar arasındaki titre farklılıkları ise % olarak ifade edildi.RTG-2 hücrelerinde kuersetinin non toksik dozunun 50 µmol/L olduğu, 50μmol/L kuersetinin RTG-2 hücrelerinde üretilen IPNV' nin titresini 10-7' den10-5' edüşürürken, aynı dozdaki kuersetinin viral yükü %40 oranında azalttığı belirlendi. Sunulan bu tez ile güçlü bir antioksidan ve anti-inflamatuar ajan olan kuersetinin invitro şartlarda IPNV replikasyonunu inhibe ettiği ve IPN hastalığının tedavisinde bir seçenek olabileceği sonucuna varıldı.

The purpose of this master thesis was to investigate the effect of quercetin on replication in cell cultures of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), which is important for the fish industry. In the project, rainbow trout gonad (RTG-2) cell culture was used to produce IPNV, after cells were cultured, IPNV was inoculated followed by CPE formation. The noncitotoxic dose of quercetin in the RTG-2 cell, the antioxidant used in the project, was determined by Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Sigma-Aldrich). Titration test, cytopathogenic effect reduction test and qRT-PCR tests were used to determine the effect of quercetin on IPNV replication. The mean value of the data from the triplicate cytotoxicity assays was calculated and the titer differences between the groups to which different doses of quercetin were administered were expressed as %. The non-toxic dose of quercetin in RTG-2 cells was 50µmol/L, and 50 μMol/L quercetin lowered the titre of IPNV produced in RTG-2 cells to 10-7 μM 10-5, while the same dose of quercetin reduced the viral load by 40%. In this thesis, it is shown that quercetin, a potent antioxidant and antiinflammatory agent, inhibits IPNV replication in in vitro conditions and that IPN may be an option in the treatment of the disease.