Piyometralı Köpek Uteruslarında Endokanabinoit Varlığının Belirlenmesi

Abstract

Piyometra, kısırlaştırılmamış dişi köpeklerde sık görülen reprodüktif sistem patolojisidir. Klinik olarak önemli bir hastalık olmasına rağmen etiyolojisi tam olarak aydınlatılamamıştır. Doğal bağışıklık sistemi yanıtları, bakteriyel virülans ve hormonal değişikliklerin hastalığın gelişiminde rol oynadığı bilinmektedir. Yangı süreçlerinin düzenlenmesinde endokanabinoit sistem (eCS) ve ısı şok proteinleri (HSP'ler) gibi mekanizmalar önemli rol oynamaktadır. Her iki sistemin de sepsis gibi ciddi enfeksiyon süreçlerinde sinerjik bir şekilde çalışabileceği düşünülmektedir. Ancak eCS ve HSP70'in köpek uterusunda ya da piyometrada varlığı ve nasıl bir rol oynadığı henüz tam olarak açıklanamamıştır. Sunulan doktora tez çalışması piyometralı ve sağlıklı köpek uterusunda bu sistemlerin varlığının araştırılmasını amaçlamıştır. Çalışmaya kapalı serviks piyometra (KP; n=7) ile açık serviks piyometra (AP; n=7) tanısı koyulan ve seksüsel siklusun diöstrüs (DÖ; n=7) ile anöstrüs (AÖ; n=7) döneminde oldukları belirlenen toplam 28 köpek (n=28) dahil edildi. Tüm gruptaki köpeklere ovaryohisterektomi uygulandı. Toplanan uterus örneklerinden kanabinoit reseptörü 1 (CB1), kanabinoit reseptörü 2 (CB2) ve HSP70'in immünohistokimyasal (İHC) ve Real-Time qPCR analizleri yapıldı. Tüm gruplardan alınan kan örneklerinden serum anandamid (AEA) ve 2-arakidonoylgliserol (2-AG) ölçümleri gerçekleştirildi. İmmünohistokimyasal analizde CB1, CB2 ve HSP70'in bütün gruplarda uterusun farklı hücresel yapılarında pozitif immünoreaktivite gösterdiği belirlendi. Real-Time qPCR analizinde ise farklı düzeylerde olmakla birlikte tüm hedef gen ifadeleri çalışmadaki her bir gruba ait uterus dokusunda saptandı. Gruplara ait CB1 gen ifadeleri arasında istatistiksel olarak anlamlı fark olduğu (p=0,004) belirlenirken CB2 ve HSP70 gen ifadeleri arasında anlamlı fark olmadığı (sırasıyla p=0,602 ve p=0,964) belirlendi. Grupların serum AEA düzeyleri arasında istatistiksel fark olduğu (p=0,017) ancak 2-AG düzeyleri arasında anlamlı fark olmadığı (p=0,072) belirlendi. Sonuç olarak; CB1, CB2 ve HSP70 hedef genlerinin piyometralı ve sağlıklı uterusta mevcut olduğu gösterilmiştir. Bu veri tüm hedef genlerin piyometralı ve sağlıklı uterusta hücresel koruma ve homeostazı sağlamaya çalıştığına dair bir kanaat oluşturmaktadır.Pyometra is a common reproductive system pathology observed in intact female dogs. Although it is a clinically important condition, its etiology has not been fully elucidated. It is known that innate immune responses, bacterial virulence, and hormonal changes play a role in the development of the disease. Mechanisms such as the endocannabinoid system (ECS) and heat shock proteins (HSPs) play significant roles in regulating inflammatory processes. It is thought that both systems may act synergistically during severe infectious conditions such as sepsis. However, the presence and role of ECS and HSP70 in the canine uterus or in pyometra have not yet been fully clarified. This doctoral dissertation aimed to investigate the presence of these systems in the uteri of healthy and pyometra-affected dogs. A total of 28 dogs (n=28) were included in the study: those diagnosed with closed-cervix pyometra (CP; n=7) and open-cervix pyometra (OP; n=7), as well as those identified to be in the diestrus (D; n=7) and anestrus (A; n=7) phases of the estrous cycle. All dogs underwent ovariohysterectomy. Uterine tissue samples were collected for immunohistochemical (IHC) and Real-Time qPCR analyses of cannabinoid receptor 1 (CB1), cannabinoid receptor 2 (CB2), and heat shock protein 70 (HSP70). Serum levels of anandamide (AEA) and 2-arachidonoylglycerol (2-AG) were measured from blood samples collected from all groups. Immunohistochemical analysis revealed that CB1, CB2, and HSP70 exhibited positive immunoreactivity in various cellular structures of the uterus across all groups. Real-Time qPCR analysis showed that, although at different levels, the expression of all target genes was detected in the uterine tissues of each group. A statistically significant difference was found in CB1 gene expression between the groups (p=0.004), whereas no significant differences were observed for CB2 and HSP70 gene expressions (p=0.602 and p=0.964, respectively). A statistically significant difference was also observed in serum AEA levels between the groups (p=0.017), but not in 2-AG levels (p=0.072). In conclusion, the target genes CB1, CB2, and HSP70 were found to be present in both pyometra-affected and healthy uteri. These findings suggest that all target genes may be involved in maintaining cellular protection and homeostasis under both pathological and physiological conditions.