Sığır Embriyosunun İn Vitro Üretimi ve Vitrifikasyonunda Sitokin (LIF) ve Büyüme Faktörünün (IGF-1) Etkileri

Abstract

Amaç: Sığır embriyolarının in vitro kültür medyumlarına yapılacak IGF–1 ve LIF ilavesinin, embriyo gelişim oranları, TE ve ICM hücre dağılımı ve dondurma sonrası yaşama gücü açısından etkisinin araştırılmasıdır. Materyal ve Metot: Çalışmada elde oositler IVM ve IVF basamaklarından geçerek BSA, IGF, LIF, IGF-LIF gruplarında kültüre alındı. Kültür sonrası toplam 217 blastosist diferansiyel boyanarak hücre sayı ortalamaları belirlendi. Diğer yandan aynı deneme gruplarında kültüre alınan 163 blastosist ise vitrifikasyona tabi tutulup çözündürüldükten sonra diferansiyel boyandı. Vitrifikasyon işlemi uygulanan ve uygulanmayan blastosistlerin canlılık oranları ve hücre dağılımları karşılaştırıldı. Bulgular: Vitrifikasyon uygulanmayan gruplarda en yüksek blastosist oranı LIF ve LIF-IGF gruplarında elde edildi. Vitrifikasyon işlemi sonrası en yüksek re-ekspansiyon oranı IGF ve IGF-LIF gruplarında elde edildi. Hücre sayılarının IGF'in tek başına ve LIF ile beraber kullanıldığı gruplarda en az değişim gösterdiği belirlenmiştir. Sonuç: İn vitro embriyo üretiminde LIF ve IGF'in hem blastosist gelişimi hem de vitrifikasyon sonrası canlılık oranlarına olumlu etkisinin olduğu görülmüştür. Anahtar kelimeler: Blastosist; diferansiyel boyama; IGF-1; in vitro fertilizasyon; LIF; vitrifikasyon

Aim: The aim of the study was to evaluate the effects of LIF and IGF-1during bovine embryo culture on blastocyst development, TE and ICM cell allocation and cryotolerance. Material and Method: Embryos were transferred into five groups BSA, IGF, LIF, IGF-LIF. At termination of the culture, 217 embryos were stained used the differential staining protocol for determination of cell number. In addition 163 embryos were cultured in the same groups. After a culture period, embryos were cryopreserved by vitrification. After a vitrification and thawing, embryos were stained. Viability and cell allocation of vitrified and non-vitrified embryos were compered. Results: Embryos in the culture medium containing IGF or IGF-LIF had increased rate and cell counts when compared to embryos cultured in other groups. Blastocyst cell counts were showed minimum variation in IGF and IGF-LIF groups. Conclusions: This study demonstrates that the addition of LIF and IGF to culture medium markedly improves the developmental potential and cryotolerance of embryos produced in vitro. Keywords: Blastocyst; differential staining; IGF-1; in vitro fertilization; LIF; vitrificaiton