Bifidobacterium Bifidum'un Nöroblastoma Hücre Hattında Antiproliferatif Etkisinin Araştırılması

Abstract

Amaç: Bağırsak normal mikrobiyotasının bir üyesi olan Bifidobacterium bifidum'un (B. bifidum) yararlı sağlık etkileri yanında antikanserojenik etkiler sergilediğine dair bilimsel çalışmalar sınırlı da olsa umut vericidir. Bu bağlamda sunulan tez çalışmasında, B. bifidum supernatantının nöroblastoma hücre hattında hücre büyümesinin inhibisyonu üzerindeki etkisinin araştırılması amaçlandı. Materyal ve Metot: Tez çalışmasında dört çalışma grubu oluşturuldu. Grup 1 (negatif kontrol grubu): Vasat ortamındaki nöroblastoma hücrelerine herhangi bir uygulama gerçekleştirilmedi. Grup 2, 3 ve 4'teki nöroblastoma hücrelerine B. bifidum supernatantı sırasıyla 24, 48 ve 72 saat boyunca uygulandı. Tüm uygulamalar dört tekrarlı gerçekleştirildi. Probiyotik bakteriyel supernatantın nöroblastom hücrelerinde sitotoksisitesini belirlemek için metiltiazoldifenil-tetrazolyum bromür testi uygulandı. B. bifidum'un antiproliferatif etkisinin belirlenmesinde hücre ölümü tespit enzim bağlı immünosorbent analiz kiti kullanıldı. Bulgular: Hücre sağkalımının negatif kontrol hücrelerinde % 100 olarak kabul edilerek diğer gruplardaki sonuçlar değerlendirildi. B. bifidum uyulanan nöroblastoma hücrelerinde 24. saatte % 102,8±1,0 (p<0,05), 48. saatte % 104,3±1,0 (p<0,01) ve 72. Saatte % 108,0±1,4 (p<0,01) olduğu belirlendi. Negatif kontrol nöroblastoma hücrelerinde zenginleşme faktörü tüm saatler düzeyinde 1 olarak kaydedildi. B. bifidum uygulanan nöroblastoma hücrelerinde zenginleşme faktörünün 24. saatte: 0,95 (p<0,05), 48. saatte: 0,88 (p<0,01) ve 72. saatte: 0,71 (p<0,01) olduğu saptandı. Sonuç: Probiyotik suşların çeşitli karsinoma hücrelerine yönelik antiproliferatif rolünü ve proapoptotik etkilerini gösteren in vivo ve in vitro çalışmaların ortaya koyduğu faydalı etkiler nedeniyle kanserin önlenmesinde ve antikanser kemoterapisi sırasında probiyotik bazlı beslenmeye olan ilgi ve güven giderek artmaktadır. Bununla birlikte, probiyotiklerin laboratuvar hayvanı modellerindeki ve farklı hücre hatlarındaki kanser karşıtı etkilerini gösteren çalışmalar daha fazla bilimsel gerekçelendirme ve klinik denemeye ihtiyaç duyulduğunu öne sürmektedir. Bu tez çalışmasından elde edilen bulguların, B. bifidum'un nöroblastoma hücre hattında uygulama süresiyle orantılı olarak hücre sağkalımını artırdığı, hücre apoptozunu baskıladığı gözlendi. Nöroblastoma hücrelerinin proliferasyonuna B. bifidum'un etkisinin in vitro koşullarda değerlendirildiği tez çalışmasının bulgularının in vivo araştırmalarla desteklenmesi gerekmektedir.Objective: Although limited, scientific studies on the beneficial health effects and anticarcinogenic effects of Bifidobacterium bifidum (B. bifidum), a member of the normal intestinal microbiota, are promising. In this context, the aim of the presented thesis study was to investigate the effect of B. bifidum supernatant on cell growth inhibition in neuroblastoma cell lines. Materials and Methods: Four working groups were created in the thesis study. Group 1 (negative control group): No treatment was made to the neuroblastoma cells in the medium. B. bifidum supernatant was applied to neuroblastoma cells in groups 2, 3, and 4 for 24, 48, and 72 hours, respectively. All experiments were performed in four replicates. The Methylthiazoldiphenyl-tetrazolium bromide test was applied to determine the cytotoxicity of the probiotic bacterial supernatant in neuroblastoma cells. A cell death detection enzyme-linked immunosorbent assay kit was used to determine the antiproliferative effect of B. bifidum. Results: Cell survival was considered as 100% in the negative control results, and the results in other groups were evaluated. In B. bifidum-treated neuroblastoma cells, it was determined to be 102.8±1.0% (p<0.05) at the 24th hour, 104.3±1.0% (p<0.01) at the 48th hour, and 108.0±1.4% (p<0.01) at the 72nd hour. The enrichment factor was recorded as 1 at all hours in the negative control neuroblastoma cells. The enrichment factor in B. bifidum-treated neuroblastoma cells was determined to be 0.95 (p<0.05) at 24 hours, 0.88 (p<0.01) at 48 hours, and 0.71 (p<0.01) at 72 hours. Conclusion: Due to the beneficial effects demonstrated by in vivo and in vitro studies showing the antiproliferative role and proapoptotic effects of probiotic strains on various carcinoma cells, interest and confidence in probiotic-based nutrition in cancer prevention and during anti-cancer chemotherapy is increasing. However, studies showing the anticancer effects of probiotics in laboratory animal models and different cell lines suggest that further scientific justification and clinical trials are needed. The findings obtained from this thesis study showed that B. bifidum increased cell survival and suppressed cell apoptosis in proportion to the application time in the neuroblastoma cell line. The findings of the thesis study, in which the effect of B. bifidum on the proliferation of neuroblastoma cells was evaluated in vitro conditions, should be supported by in vivo studies.