Brusellozun Serolojik Tanısında Konfirmasyon ve Aşılı-Enfekte Ayırım Stratejisi Amaçlı Çeşitli Brusella Antijenlerinin Test Yöntemleriyle Değerlendirilmesi

Abstract

Bu çalışmada, rekombinant BP26, EryC ve LPS antijenlerinin tanı performansı ve geçerliliği Brucella abortus S19 aşılı, enfekte ve serolojik testlerle doğruluğu onaylanmış referans kan serumlarına bağlı olarak ELISA modeliyle değerlendirildi. Enfekte ve sağlıklı hayvan serumlarında testlerin tanısal performansı karşılaştırıldı, enfekte ve endemik bölgeyi temsilen alınan örneklerle test validasyonları yapıldı. Ayrıca konjunktival ve derialtı uygulamalarla elde edilmiş serumlarda test performansı değerlendirildi. Testlerin duyarlılığı en yüksek %95 oranı ile LPS'e karşı, ardından %91,67 ile BP26'ya ve %88,33 ile EryC antijenlerine yönelik olarak tespit edildi. Özgüllük açısından ise %92,94 ile BP26 öne çıkarken, LPS ve EryC %90,59 oranında özgüllük gösterdi. Doğruluk oranları LPS ve BP26 için %92,41, EryC için %89,65 olarak belirlendi. Kappa uyum katsayısı LPS-BP26 için 0,958, LPS-EryC için 0,994 ile güçlü ve anlamlı bulundu (p<0,01). X² analizleriyle de bu sonuçlar doğrulandı. Derialtı aşılı buzağı serumlarında LPS ve rBP26'ya benzer oranlarda pozitiflikler belirlenirken rEryC'de önemli farklar saptanmıştır (p<0,01). Konjunktival aşılılarda da önemli oranda EryC negatif sonuçlar elde edilerek, istatistiksel olarak diğer antijenlerden farklılık belirlenmiştir (p<0,05). Bu nedenle, aşılı serum örneklerinde rEryC'nin LPS veya rBP26 ile birlikte değerlendirilmesi tavsiye edilir. Test validasyon çalışmaları bakteri izolasyonu yapılmış ve endemik bölgeden alınan örneklerle yapıldı. Bu çalışmalarda, LPS-rBP26 ELISA sonuçları oldukça uyumlu(k=0,789; k=0,711) ve önemli bulunmuştur (p<0,01). Ancak, EryC için bu uyum orta dercede belirlenmiştir. Çalışmada test edilen antijenlere bağlı sonuçların yüksek düzeyde sonuçlar vermesi sebebi ile Lateral flow test optimizasyon çalışmaları başlatılmış ancak henüz validasyonu tamamlanamamıştır.In this study, the validity and diagnostic performances of ELISAs based on recombinant BP26, EryC, and LPS antigens were evaluated using the blood sera obtained from Brucella abortus S19-vaccinated, infected, and serologically confirmed cases. The diagnostic performance of the tests was compared between sera from infected and healthy animals, and validation was carried out using samples representing both infected and endemic regions. Additionally, sera obtained via conjunctival and subcutaneous vaccination routes in immunized animals were assessed to evaluate test performance. Among the antigens tested, LPS showed the highest sensitivity at 95%, followed by BP26 at 91.67% and EryC at 88.33%. Regarding specificity, BP26 was superior at 92.94%, while LPS and EryC both demonstrated a specificity of 90.59%. The accuracy rates were calculated as 92.41% for both LPS and BP26, and 89.65% for EryC. Kappa agreement values indicated strong and statistically significant concordance for LPS-BP26 (κ = 0.958) and LPS-EryC (κ = 0.994) pairs (p<0.01). These findings were further corroborated by chi-square analyses. In sera obtained from subcutaneously vaccinated calves, similar positivity rates were observed for LPS and BP26, whereas EryC yielded significantly different results in chi-square comparisons (p<0.01). In conjunctivally vaccinated calves, EryC produced only negative results and was statistically distinct from the other antigens (p<0.05). Therefore, combined use of EryC with either LPS or BP26 is recommended, particularly in vaccinated animals. Test validation studies were conducted using samples obtained from endemic regions and from cases where bacterial isolation had been performed. In these studies, the results of the LPS-rBP26 ELISA showed substantial agreement (κ = 0.789; κ = 0.711) and were found to be statistically significant (p<0.01). However, the level of agreement for EryC was determined to be moderate. Due to the high performance of the results obtained with the antigens tested in this study, lateral flow test optimization studies were initiated; however, their validation has not yet been completed.