Pseudomonas Aeruginosa İzolatlarında Virulans Genlerinin Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) ile Tespiti ve Yüksek Riskli Klonların Matriks ile Desteklenmiş Lazer Desorpsiyon İyonizasyon Uçuş Zamanı Kütle Spektrometresi Yöntemi (MALDI-TOF MS) ile Araştırılması

Abstract

GİRİŞ VE AMAÇ: Pseudomonas aeruginosa, nonfermentatif Gram negatif basildir. P. aeruginosa patogenezinde, birçok virülans faktörü rol oynamaktadır. Bu çalışmada P.aeruginosa çoklu ilaç direnci ile birlikte artmış salgın yapma potansiyeli olan yüksek riskli klonları olarak adlandırılan ST111, ST175, ST235, ST253, ST395'in MALDI-TOF MS yöntemi ile erken tespiti ve P. aeruginosa virulans faktörlerinin üretiminde rol alan genlerin PZR ile araştırılması amaçlanmıştır. GEREÇ VE YÖNTEM: Ondokuz Mayıs Üniversitesi Hastanesi Tıbbi Mikrobiyoloji laboratuvarına 01.01.2021-07.06.2022 tarihleri arasında çeşitli kliniklerden gönderilen örneklerden izole edilen P. aeruginosa izolatları (n:100) kullanılmıştır. P. aeruginosa izolatlarında, toxA tespiti için uniplex; algD, plcN, lasB, plcH tespiti için multiplex PZR yapılmıştır.Yüksek riskli klonlara özgü piklerin araştırılması, MALDI-TOF MS yöntemiyle, Vitek- MS (Biomeriux, France) kullanılarak yapılmıştır. BULGULAR: PZR işlemi sonuçlarında ToxA %89, LasB %99, PlcH %98, PlcN %100 ve AlgD %100 oranında pozitif olarak saptanmıştır. MALDI-TOF MS ile yüksek riskli klonlarının varlığı değerlendirildiğinde en sık saptanan yüksek riskli klon ST111 (%49) olup bunu, ST253 (%7), ST175 (%6) takip etmektedir. ST235 ile ST395 klonları ise çalışmamızda saptanmamıştır. TARTIŞMA VE SONUÇ: Virulans faktörleri hem yüksek riskli klonlarda hem de diğer suşlarda yüksek oranlarda tespit edilmiş olup, yüksek riskli klonlar ile virulans faktörleri arasında anlamlı bir ilişki tespit edilmemiştir. Bu ilişkiyi değerlendirmek için daha ileri moleküler çalışmaların yapılmasına ihtiyaç olduğu düşünülmektedir. Yüksek riskli klonların erken tespiti ve uygun antimikrobiyal tedavi gibi stratejik tedavi seçeneklerinin geliştirilebilmesi yüksek riskli klonların dünya çapında yayılımını engellemeye yardımcı olacaktır. ANAHTAR KELİMELER: Virulans faktörleri, Yüksek riskli klon, MALDI-TOF MS.OBJECTİVE: Pseudomonas aeruginosa is a nonfermentative Gram negative bacillus. Many virulence factors play a role in the pathogenesis of P. aeruginosa. In this study, early detection of ST111, ST175, ST235, ST253, ST395, which are high- risk clones with increased epidemic potential with P.aeruginosa by MALDI-TOF MS method and It was aimed to investigate the genes involved in the production of virulence factors by PCR. MATERİALS AND METHODS: P. aeruginosa isolates (n:100) isolated from samples sent from various clinics to Ondokuz Mayıs University Hospital Medical Microbiology laboratory between 01.01.2021 and 07.06.2022 were used. Uniplex PCR for toxA; multiplex PCR was performed for the detection of algD, plcN, lasB, plcH. Investigation of peaks specific to high-risk clones was performed using MALDI-TOF MS method using Vitek-MS (Biomeriux, France). RESULTS: In the PCR results, ToxA 89%, LasB 99%, PlcH 98%, PlcN 100% and AlgD 100% were positive. When the presence of high-risk clones was evaluated with MALDI-TOF MS, the most frequently detected high-risk clone was ST111 (49%), followed by ST253 (7%) and ST175 (6%). ST235 and ST395 clones were not detected in our study. CONCLUSİON: Virulence factors were detected at high rates in both high-risk clones and other strains, and no significant relationship was found between high-risk clones and virulence factors. It is thought that further molecular studies are needed to evaluate this relationship. Early detection and appropriate antimicrobial therapy will help prevent the worldwide spread of high-risk clones. KEYWORDS: Virulance factors, High-risk clones, MALDI-TOF MS.