Soya Bitkisinden (Glycine Max L.) Glutatyon Redüktaz Enziminin Saflaştırılması ve Bazı Ağır Metallerin İnhibisyon Kinetiğinin İncelenmesi

Abstract

Bu çalışmada, önemli fonksiyonlarda görev alan glutatyon redüktaz (Glutatyon: NADP+ oksidoredüktaz, E.C. 1.8.1.7: GR) enzimi soya tohumundan saflaştırılmıştır. Saflaştırma işleminde homojenatın hazırlanmasının ardından amonyum sülfat çöktürmesi ve afinite kromatografisi metodları kullanılmıştır. Saflaştırılan soya glutatyon redüktaz enzimi SDS poliakrilamid jel elektroforezinde yaklaşık 75 kDa molekül ağırlığında tek bant şeklinde görüntülenmiştir. Soya tohumu glutatyon redüktaz enzimi için optimum iyonik şiddet, pH ve substrat miktarı araştırılmıştır. Enzimin optimum iyonik şiddeti 300 mM Tris, optimum pH değeri 8.5 ve optimum substrat miktarı 90 mM olarak bulunmuştur. Doğada bulanan ağır metallerden gümüş, mangan, kadmiyum, bakır, çinko, nikel, krom, magnezyum ve baryum'un saflaştırılmış soya tohumu glutatyon redüktaz enzim aktivitesi üzerine inhibitör etkileri araştırılmıştır. Bu ağır metallerin her birinin enzim aktivitesi üzerinde inhibisyon etkisi gösterdiği tespit edilmiştir ve I50 değerleri hesaplanmıştır. Soya tohumu GR enzimi için bu ağır metallerin I50 değerleri sırasıyla 0.00025 mM, 3.305 mM, 0.0016 mM, 0.318 mM, 0.015 mM, 0.21 mM, 2.394 mM, 3.881 mM ve 1.576 mM olarak belirlenmiştir.

In this study, glutathione reductase (Glutathione: NADP+ oxireductase, E.C. 1.8.1.7: GR), an enzyme involved in significant functions, has been isolated from soybean seeds. Following the preparation of the homogenate, ammonium sulphate precipitation and affinity chromatography methods were performed for purification. Purificated soybean glutathione reductase enzyme was screened as a single band of about 75 kDa molecular weight in polyacrylamide gel electrophoresis. Optimum ionic strenght, pH and substrate amounts were examined for soybean seed glutathione reductase enzyme. These values were found to be 300 mM for optimum ionic strenght, 8.5 for pH and 90 mM for Tris. Inhibitory effects of some of the common heavy metals in nature, namely silver, manganese, cadmium, copper, zinc, nickel, chromium, magnesium and barium on the purificated soybean seed glutathione reductase enzyme were investigated. Each of the heavy metals showed inhibitory effect on enzyme activity. I50 values of these heavy meatls were determinated as 0.00025 mM, 3.305 mM, 0.0016 mM, 0.318 mM, 0.015 mM, 0.21 mM, 2.394 mM, 3.881 mM and 1.576 mM, respectively.