Mastitisli Sığırlardan İzole Edilen Staphylococcus Aureus İzolatlarının Virülens Gen Profillerinin Belirlenmesi

Abstract

Bu çalışmada mastitisli sığır sütlerinden izole edilen stafilokok izolatlarının Staphylococcus aureus yönünden moleküler doğrulanması ve izolatlarda bazı önemli virülens genlerin tespiti amaçlandı. Bu amaçla 140 stafilokok izolatının termonükleaz (nuc) geni varlığı PCR ile incelendi. 42 izolatta nuc geni (279 bp) tespit edildi ve S. aureus olarak identifiye edildi. Diğer yandan izolatlar lökotoksin geni (pvl), stafilokokal klasik enterotoksin genleri (sea, seb, sec), eksfolyatif toksin genleri (eta, etb), hemolizin genleri (hla, hlb), adezin faktör genleri (fnbA, fnbB, clfa) ve toksik şok sendrom toksin geni (tst) yönünden 3 farklı multiplex PCR ile incelendi. Böylece izolatlarda 12 farklı virülens geninin varlığı ortaya konuldu. İzolatlatların 30 (%71.4)'u clfa, 24 (%57.1)'ü hla, 14 (%33.3)'ü hlb, 10 (%23.8)'u fnbB, 6 (%14.2)'sı fnbA, 6 (%14.2)'sı etb, 5 (%11.9)'i sec, 5 (%11.9)'i tst, 3 (%7.1)'ü sea, 2 (%4.7)'si pvl ve 1 (%2.3)'i eta geni açısından pozitif bulundu. İzolatların hiçbirinde seb geni saptanamadı. 42 izolatın 38'inde bir ya da daha fazla virülens geni belirlenirken, 4 izolatta incelenen virülens genlerin hiçbiri saptanamadı. İzolatların 29'unda iki ya da daha fazla virülens gen açısından çoğul pozitiflik belirlendi. İncelenen izolatlarda en fazla tespit edilen virülens genlerin clfa ve hla olduğu görüldü. Sonuç olarak sınırlı dahi olsa sığır mastitislerinin patogenezinde rol oynayan virülens gen patternleri ortaya konuldu. Çalışma sonuçlarının sığır mastitislerinin etiyolojisinde önemli rol oynayan S. aureus'a ait virülens faktörlerinin karakterizasyon çalışmalarına katkı sağlayacağı kanaatine varıldı. Anahtar Sözcükler: Mastitis, sığır, Staphylococcus aureus, virulens gen profili

In this study, the molecular confirmation of Staphylococcus aureus isolates from bovine milk with mastitis and determination of some important virulent genes in the isolates were aimed. For this purpose, the presence of thermonuclease (nuc) gene in 140 S. aureus isolates was examined by PCR. The nuc gene (279 bp) was detected in 42 isolates. On the other hand, isolates were examined with 3 different multiplex PCRs in terms of leukotoxin gene (pvl), staphylococcal classical enterotoxin genes (sea, seb, sec), exfoliative toxin genes (eta, etb), hemolysin genes (hla, hlb), adhesin factor genes (fnbA, fnbB, clfa) and toxic shock syndrome toxin gene (tst). Thus, the presence of 12 different virulence genes may occur in isolates. Of the isolates were found to be positive 30 (71.4%) for clfa, 24 (57.1%) hla, 14 (33.3%) hlb, 10 (23.8%) fnbB, 6 (14.2%) fnbA, 6 (14.2%) etb, 5 (11.9%) sec, 5 (11.9%) tst, 3 (7.1%) sea, 2 (4.7%) pvl and 1 (2.3%) eta genes. seb gene was not detected in any of the isolates. While one or more virulence genes were determined in 38 of 42 isolates, none of the virulent genes examined in 4 isolates could be detected. Multiple positivity was determined for two or more virulent genes in 29 of the isolates. It was seen that the most virulent genes in the analyzed isolates were clfa and hla. As a result, virulence gene patterns that play a role in the pathogenesis of bovine mastitis, even if limited, were revealed. It was concluded that the results of the study will contribute to the characterization studies of virulent factors belonging to S. aureus, which play an important role in the etiology of bovine mastitis. Keywords: Bovine, mastitis, Staphylococcus aureus, virulence gen profile