Sığır Eritrositlerinden Karbonik Anhidraz Enziminin Saflaştırılması ve Bazı Antibiyotiklerin Enzim Aktivitesi Üzerine Etkilerinin İncelenmesi

Abstract

Bu çalışmada sığır eritrositlerinden karbonik anhidraz enzimi saflaştırılmış ve bazı yaygın antibiyotiklerin enzim aktivitesi üzerine etkileri incelenmiştir. Saflaştırmada afinite kromatografisi kullanılmıştır. Enzim %48,6 verim, 304,7 kat saflaştırma katsayısı ve 352201 U/mg spesifik aktiviteyle saflaştırılmıştır. Enzimin saflığını kontrol etmek amacıyla SDS-PAGE yöntemi uygulanmıştır ve molekül kütlesi 31,5 kDa olarak belirlenmiştir. Ayrıca enzim aktivitesi üzerine sığırlarda kullanılan bazı antibiyotik ilaçların etken maddelerinin in vitro şartlarda inhibisyon ve aktivasyon etkileri incelenmiş ve IC50 değerleri hesaplanmıştır. IC50 değerleri hidrataz aktivitesiyle oksitetrasiklin, enrofloksasin ve gentamisin sülfat için sırasıyla 0,019 mM, 0,052 mM ve 2,89 mM olarak hesaplanmıştır. Esteraz aktivitesiyle oksitetrasiklinin IC50 değeri 0,266 mM olarak hesaplanmıştır. Anahtar Kelimeler: Karbonik Anhidraz; Sığır; Antibiyotik; İnhibisyon.In this study carbonic anhydrase enzyme from bovine erytrocytes was purified with affinity chromatography and effects of some common antibiotics on enzyme activity were investigated. Enzyme was purified with a yield of 48,6 %, spesific activity of 352201 EU/mg and a purification fold of 304,7. To determine the purify of enzyme SDS-PAGE method was performed and molecular weight of the enzyme was calculated as 31,5 kDa. Furthermore, in vitro inhibitory and activatory effects of the active substances of some common antibiotics were investigated. By means of hydratase method IC50 values were calculated for oxytetracyclin, enrofloxacin and gentamicin sulphate 0,019 mM, 0,052 mM and 2,89 mM, respectively. By means of esterase activity IC50 value for oxytetracyclin was calculated as 0,226 mM. Key Words: Carbonic Anhydrase; Bovine; Antibiotic; Inhibition.